Витамин D, антимикробные пептиды и тяжесть кариеса: новое исследование

Дефицит витамина D является одной из наиболее распространенных и недиагностированных проблем среди населения Индии. Исследования показали, что от 50 до 94% населения имеют дефицит витамина D. Это связано с низким потреблением витамина D с пищей, малым пребыванием на солнце и загрязнением воздуха, препятствующим синтезу витамина D в коже.

Дефицит витамина D ассоциирован с развитием аутоиммунных, инфекционных и онкологических заболеваний, проблемами скелета и депрессией. Он также влияет на здоровье полости рта, вызывая нарушения формирования и минерализации зубов, болезни пародонта и другие проблемы.

Витамин D играет важную роль во врожденном иммунитете, стимулируя дифференцировку и созревание иммунных клеток. Он усиливает экспрессию генов антимикробных пептидов, таких как кателицидин LL-37. Этот эффект опосредован через витамин D-рецепторы иммунных клеток.

Витамин D регулирует выработку провоспалительных и противовоспалительных цитокинов, в том числе интерлейкина-6, который играет важную роль в иммунном ответе полости рта.

Цель данного исследования - оценить связь концентраций витамина D в слюне с уровнями других биомаркеров и тяжестью кариеса зубов.

Анализ уровня витамина D в слюне

Анализ уровней витамина D в слюне проводили с использованием набора для иммуноферментного анализа 25OH Vitamin D Total ELISA Kit. В лунки планшета вносили по 20 мкл образцов слюны, калибраторов и контрольных образцов вместе с 100 мкл буферного раствора для анализа витамина D.

Пластинки накрывали алюминиевой фольгой и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем в каждую лунку добавляли по 25 мкл биотинилированного аналога витамина D и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. После этого каждую лунку промывали 5 раз 350 мкл промывающего раствора.

Далее добавляли по 100 мкл пероксидазы хрена, конъюгированной со стрептавидином, и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. Несвязавшиеся элементы удаляли из лунок промыванием 5 раз по 350 мкл буферным раствором.

Затем в каждую лунку вносили по 100 мкл тетраметилбензидина и инкубировали в течение 20 минут, после чего добавляли по 100 мкл стоп-раствора. Поглощение реакционной смеси измеряли спектрофотометрически при 450 нм в течение максимум 10 минут.

Анализ уровня кателицидина в слюне

Для анализа уровней кателицидинов в слюне использовали предварительно покрытый планшет для иммуноферментного анализа с иммобилизованными антителами, специфичными к LL-37. Контрольные образцы вносили в лунки планшета вместе со специфичными антителами и инкубировали при комнатной температуре.

Затем добавляли биотинилированные детектирующие антитела, специфичные к человеческому LL-37, и конъюгат стрептавидин-пероксидаза. Проводили инкубацию и отмывку для удаления неконъюгированных комплексов. Добавляли субстрат, в результате реакции лунки с комплексами окрашивались в синий цвет. Реакцию останавливали добавлением стоп-раствора. Оптическую плотность измеряли спектрофотометрически при 450±2 нм.

Анализ уровней IL-6 и IL-17A в слюне

Анализ IL-17A и IL-6 проводили с использованием коммерческих наборов для иммуноферментного анализа. Для IL-17A использовали твердофазный сэндвич-вариант ИФА. Образцы и стандарты вносили в лунки планшета с иммобилизованными антителами к IL-17A. После промывки добавляли конъюгат пероксидазы с антителами к IL-17A. Добавляли субстрат ТМБ, инкубировали и останавливали реакцию стоп-раствором. Оптическую плотность измеряли при 620 нм.

Для анализа IL-6 также использовали сэндвич-вариант ИФА с иммобилизованными моноклональными антителами. После образования комплексов антиген-антитело добавляли конъюгат стрептавидин-пероксидаза. После инкубации и промывки добавляли ТМБ и стоп-раствор. Оптическую плотность измеряли при 450 нм.

Статистический анализ

Проводили статистический анализ собранных данных по частоте, процентам, средним значениям и стандартным отклонениям. Для сравнения параметров слюны между группами использовали критерий хи-квадрат. Для двух групп проводили дисперсионный анализ ANOVA и t-тест.

Анализ рабочих характеристик приемника выполняли для определения оптимальных уровней чувствительности и специфичности витамина D, LL-37, IL-17A и IL-6 в слюне. Статистический анализ проводили с использованием программного обеспечения SPSS. Уровень значимости устанавливали равным p≤0.05.

Демографические характеристики

Из 272 человек с активным кариесом и 105 без кариеса 239 были женщины и 138 мужчины. Лица из городских районов достоверно чаще имели 1 группу кариеса (1-3 кариеса). Возрастная группа 18-25 лет чаще имела 1 группу кариеса, а группа 26-35 лет - 2 и 3 группы кариеса. У лиц из города показатель PUFA был равен 0.

Практические выводы

Исследование показало, что более высокие уровни витамина D в слюне коррелируют с меньшей распространенностью и тяжестью кариеса зубов. Это свидетельствует о важной роли витамина D в поддержании здоровья полости рта и профилактике стоматологических проблем.

Достаточный уровень витамина D усиливает иммунитет ротовой полости за счет стимуляции выработки антимикробных пептидов, которые защищают от кариесогенных бактерий.

Поэтому для профилактики кариеса и заболеваний пародонта рекомендуется поддерживать адекватный уровень витамина D с помощью диеты, витаминных комплексов или умеренного пребывания на солнце. Коррекция дефицита витамина D может стать частью комплексной профилактики и лечения стоматологических проблем.